### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：人前列腺癌细胞VCAP
**生长特性**：贴壁
**冻存条件**：无血清冻存液
**培养体系**：DMEM（含NaHCO₃ 15g/L） + 10% FBS + 1% P/S
**传代方法**：第一次建议1:2传代
**备注**：请用无菌离心管收集瓶中的培养基，以便进行对比培养。如果对比效果不佳，建议直接使用尊龙凯时提供的完全培养基。

### 二、细胞处理及培养

收到细胞后，将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输过程中细胞的健康。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后在超净台内进行严格的无菌操作。随后，将细胞瓶置于37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，如果未提供，默认收到细胞状态良好。

### 三、细胞传代步骤

**a. 细胞传代**：如果细胞汇合度未超过80%，请将完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基并置于37℃、5% CO₂孵箱中；若细胞密度超过80%，请进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况；若大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养。

**b. 细胞冻存**：当细胞生长达到80%覆盖率时，弃去T25培养瓶中的培养液，使用PBS清洗细胞一次。添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，通过显微镜观察细胞，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化。将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟，弃上清后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中进行冰冻保存。

### 四、细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%酒精擦拭冻存管外壁。将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。弃去上清，将细胞用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中，第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

### 五、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会出现脱落的现象，这是正常的。如脱落细胞较多，请将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，然后对沉淀进行处理，使用胰酶进行消化等。

### 六、售后条款

尊龙凯时-人生就是博提供售后服务保障，如遇细胞问题，我们会依据具体情况进行重发。请注意保持良好的细胞培养环境和操作规范，以确保细胞的健康状态。如有疑问，请及时与我们联系。