尊龙凯时-人生就是博致力于提供高质量的人小胶质细胞HMC3培养方案，以下是详细的细胞培养说明。

一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：细胞采用贴壁生长方式

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM+10%FBS+1%P/S

传代方法：首次建议按1:2进行传代。传代后，每2天更换培养基。建议使用无菌离心管收集培养基以便进行效果对比，如效果不理想，推荐直接选购尊龙凯时-人生就是博的完全培养基。

二、细胞处理及培养方法

收到细胞后，待细胞恢复至良好状态后，注入完全培养液并密封瓶口，以保证细胞运输最佳状态。首先，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净台下进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以便稳定细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录，前三天的照片为售后重要依据，未提供照片将默认接受状态良好。建议在传代后，一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以便后续对比培养，换液后将瓶盖稍微松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集培养液至离心管中，留5ml完全培养基放于37℃、5%CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，如细胞大部分变圆并脱落，则迅速轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使之完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例分瓶传代（分为两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞在培养瓶中生长覆盖面积达80%时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，倒置观察，待细胞回缩变圆时添加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落后转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，沉淀细胞并加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放入-80℃冰箱保存，若后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱存放至少24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，之后用75%的酒精擦拭管外壁。
2. 将细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃上清后，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5%CO2细胞培养箱培养。
4. 次日，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，一些细胞可能粘附不牢，导致脱落现象，这是正常的。如脱落较多，收集培养液至离心管中，进行1000rpm离心5分钟，收集上清作过渡培养。继续操作时，加入0.5-1ml胰酶轻轻吹打消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止消化，再次离心处理。

五、售后条款

1）细胞问题重发标准

1. 运输中发生的细胞丢失、瓶身破损、或培养液严重漏液，予以重发。
2. 收到细胞后48小时内如出现污染，请提供实验结果，核实后重发。
3. 对普通和冷链运输的细胞，如复苏后细胞存活率低需提供照片，符合条件予以重发。
4. 出现污染问题并未开封且在规定时间内，予以重发。
5. 细胞活性问题需在7天内提供实验结果，合格后进行重发。
6. 前三天内和有问题时需拍照记录，不告知视为合格。

2）不予重发情况

1. 客户自行造成的细胞污染，不予重发。
2. 因客户操作不当导致的细胞状态不佳，不予重发。
3. 使用非推荐培养体系造成的细胞问题，不予重发。
4. 未提供前三天照片且细胞状态不佳，则不予重发。
5. 其它特殊处理造成的细胞问题，不予重发。
6. 收到后2天内未告知问题的，不予重发。
7. 具体情况将另行评估处理。

请使用尊龙凯时-人生就是博提供的高质量细胞培养服务，确保您的实验顺利进行。