尊龙凯时-人生就是博在大鼠原代脂肪间充质干细胞提取中的应用

实验材料准备

选择约两周龄或重约200克的SD大鼠。准备无菌器械，如镊子、眼科直剪和弯剪、磁珠等。同时，需准备5mL注射器、0.22μm滤器、泡沫板和图钉以便固定大鼠。此外，需用75%乙醇进行消毒。确保有预冷的无菌PBS水，以及15mL和50mL无菌离心管、细胞筛和无菌培养瓶等材料。同时，要准备SD大鼠脂肪间充质干细胞完全培养基。

实验操作

首先，将所需物品放置于超净工作台，并使用紫外线进行30分钟消毒。然后，配制0.1%Ⅰ型胶原酶约5mL，并进行滤器消毒处理。为了提取细胞，首先将大鼠脱颈处死，然后将其浸泡于75%酒精中2-3分钟，之后固定在泡沫板上。剪开大鼠腹股沟区皮肤直至腹腔，以暴露出脂肪组织，细心剪取脂肪组织并放入PBS中，避免剪到血管。接着，用PBS对脂肪组织进行清洗，并剔除多余的血管和淋巴结。

将脂肪组织剪碎至适宜大小（如2mm×2mm），加入预先配制的胶原酶，放于37℃下进行消化，每隔5分钟进行震荡或持续搅拌。消化完成后，将得到的细胞悬液转移至离心管中进行离心，弃去上层脂滴泡沫和上清液，用培养基重悬沉淀，并进行过滤。再次离心，弃去上清，用培养基重悬液，并接种到培养瓶中。最后，将培养瓶放置于37℃、含有5% CO2的培养箱中进行培养。

注意事项

在实验全过程中，必须保持无菌操作，以防细胞污染。在剪取和清洗脂肪组织时需细致小心，避免损伤细胞或引入杂质。消化过程中，应严格控制时间和温度，防止过度消化造成细胞损伤。在离心和过滤处理时，需轻柔操作，以避免细胞损失或破裂。通过遵循这些步骤，您能更好地提取大鼠原代脂肪间充质干细胞，为相关生物医疗研究提供可靠材料，并进一步推动尊龙凯时-人生就是博的科研进程。