尊龙凯时-人生就是博为您提供HL-7702人肝正常细胞[L-02]的详细培养说明。本说明书分为几个部分，旨在帮助您顺利培养和管理这些细胞。

一、细胞培养条件

细胞名称：HL-7702人肝正常细胞[L-02]
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）
培养体系：1640培养基 + 10%胎牛血清 + 1%双抗
传代方法：第一次建议以1:2比例进行传代。

备注：用无菌离心管收集培养基，以便进行过渡对比培养。如对比效果不佳，建议直接采购我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

细胞在运输到达后，请培养至良好状态，并将瓶口封好，这是确保细胞运输状态的最佳方法。打开细胞瓶之前，使用75%酒精对瓶体进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以恢复细胞状态。观察细胞的生长情况，并在显微镜下拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片将用于售后依据。未提供照片视为细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 当细胞汇合度未超过80%时，将完全培养液收集存入离心管，留5ml完全培养基，置于37℃、5% CO2孵箱中培养。
2. 如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤为：
- 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
- 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态。如果细胞大部分变圆并脱落，快速回到操作台，轻敲培养瓶并加入超过5ml的完全培养基终止消化。
- 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，以1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
- 按1:2的比例分装细胞悬液至两个T25瓶中，补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶的80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃的冰箱。如果后续要转入液氮罐，请先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管，注意佩戴防护设备，迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管内细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞可能在运输过程中脱落，若出现脱落较多的现象，可将培养瓶内培养液收集至离心管中，加以离心并进行过渡培养。轻轻处理细胞，并在消化后按常规步骤进行分瓶传代。

五、售后条款

以下是细胞出现问题时重发的情况及不予重发的情况。
1）可重发的情况包括：运输过程中细胞丢失、瓶身破损、培养液漏液等；48小时内报告细胞污染；复苏后48小时内细胞活性问题等。
2）不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染或不当操作；使用非推荐培养体系等。
请在7天内提供真实的实验结果，我们将根据情况进行处理。

为确保您的实验成功，建议遵循以上操作步骤，如果有任何疑问，欢迎咨询尊龙凯时-人生就是博的技术支持团队，我们将竭诚为您服务。